该试验表明，在化疗期间服用小球藻，能提升化疗药物的效果，同时保护了患者的免疫功能免受伤害。

蛋白核小球藻提取物的抑瘤作用及对免疫功能的影响

​汪 炬， 蒲含林， 洪 岸，戴 云，杨小柯，何柳媚

（暨南大学生物工程研究所，广州 510632）

【摘 要】 

目的： 研究蛋白核小球藻提取物（CE）的抗癌作用及其对免疫功能的影响。

方法：以动物移植性肿瘤肉瘤S180、肝癌HCA 腹水瘤为模型，以环磷酰胺为阳性对照，以生理盐水为阴性对照，观察356、178mg/ml 的CE的体内外抗肿瘤作用，采用CE对巨噬细胞吞噬功能及对淋巴细胞增殖反应的作用观察其对免疫系统的影响。

结果：两种浓度的CE与阴性对照组相比在体外对肉瘤S180、肝癌HCA 腹水瘤细胞均有较强的杀伤力，在体内对两种肿瘤抑癌作用显著，与环磷酰胺（一种化疗药物）联合使用效果更佳，且CE 对小鼠免疫系统具有较强的激活作用。

结论：CE对移植性S180肉瘤小鼠和肝癌HCA腹水瘤小鼠具有抗肿瘤作用及化疗增效作用，并对免疫功能有调节作用。

关键词： 小球藻； 抗肿瘤； S180 肉瘤； 肝癌HCA 腹水瘤；免疫调节

中图分类号：R151.1  

文献标识码：A 

文章编号：0512-7955(2004)02-0136-04

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Chlorella pyrenoidosa Chick.，蛋白核小球藻，属绿球藻目小球藻科小球藻属的一种（1），单细胞，可快速增殖，含有丰富的蛋白质，具有多种保健作用而无毒副作用，可增强机体免疫能力，并具有抗肿瘤、抗病毒、抗衰老作用，对高血压等心血管疾病亦有一定的辅助疗效（2）。由于小球藻细胞壁较难破碎，有必要对小球藻活性成分进行提取，本研究对此小球藻提取物进行了抗S180 肿瘤及腹水肝癌作用的研究，并初步研究其对免疫功能的影响。

1 材 料

材料：蛋白核小球藻经热水提取后，冻干为小球藻提取物（CE）。NIH 清洁级小鼠，体重18±2g，雌雄各半，购自第一军医大学试验动物中心（合格证号：粤检证字第2000A037 号）；S180瘤株购自广州中山医科大学实验动物中心；肝癌HCA 腹水瘤株购自广州中山医科大学肿瘤研究所。环磷酰胺为上海华联制药有限公司出品，批号为020306，MTT 购自Sigma 公司，DMEM 培养基购自GIBCO 公司。

​2 方 法

2.1 CE 溶液配制

称取CE 冻干粉，经预实验确定用生理盐水配成356 mg/ml 的CE 溶液为高剂量，将其稀释一倍为低剂量溶液。

2.2 体外抑瘤试验

抽取S180肉瘤鼠腹水及肝癌HCA 腹水瘤细胞，用预先配制好的细胞培养液（2）（10％小牛血清 ＋90％DMEM）稀释至细胞计数板上，使每小格中约有10 个细胞，然后在96 孔板中每孔加入190 ul 的细胞稀释悬液及10 ul 的不同浓度的CE 和环磷酰胺(C)，以生理盐水（NS）作为对照。于5％二氧化碳培养箱中37℃培养24h 后，计算总细胞数，采用台盼蓝拒染法测定细胞死亡率。

2.3 瘤株接种

在无菌条件下取小鼠，分别将S180 肿瘤腹水和肝癌HCA 腹水用3 倍体积生理盐水稀释，于小鼠前肢腋窝下接种每只0.2 ml。以上瘤株接种前，均采用0.2%台盼蓝染色，计活细胞数为95％～98％。

2.4 体内抑瘤试验

S180 观察组与HCA 观察组小鼠分别于接种次日随机分组，每组9 只，按正常条件喂养。抑癌试验设生理盐水对照组（NS），环磷酰胺组（C），CE 高、低剂量组，C+CE 高剂量组，C+CE 低剂量组。各组剂量见表1。接种次日起每天给药一次，连用10 d，均ip 给药，停药次日小鼠称重，处死后剥离瘤块，称瘤重。试验重复进行3 批（3）。

2.5 CE 对实验动物免疫功能的影响（4）

2.5.1 试验动物分组和给药方法：试验动物随机分组，每组10 只，分设生理盐水对照组（NS）、环磷酰胺组（C）、CE 高剂量组、CE 低剂量组，接种次日起每天给药一次，连用10 d，均ip 给药。

2.5.2 巨噬细胞吞噬功能测定：D12 用颈椎脱臼法处死小鼠，腹腔内注射5 ml 4℃下Krebs 液，轻揉数分钟后，解剖小鼠，无菌吸取腹腔液于离心管中，调整细胞浓度为5×10的6次方/ml，以每孔100 ul 加入96孔板中，于5％二氧化碳培养箱中37℃培养4h 使巨噬细胞贴壁，用10％FCS-DMEM 液洗3 遍，每孔加脱色剂无水乙醇/冰醋酸100 ul，室温放置1 h 后混匀，用酶标仪测定吸收度（主波长490 nm，参比波长为570 nm）。

2.5.3 淋巴细胞增殖反应（MTT 法）：解剖上述各组小鼠，吸取腹腔液后，无菌取脾脏，用DMEM 完全培养液洗涤2 次，1 000 r/min 离心10 min，然后用完全营养液配成细胞浓度为5×10的6次方 /ml，以每孔100 ul 加入96 孔板中，于5% 二氧化碳培养箱中37℃培养48 h，然后每孔加入10 ul 5 mg/ml 的MTT 溶液，再培养12 h，加入MTT 溶解液100 ul，充分振荡后静止20 min，用酶标仪测吸收度（主波长为450 nm，参比波长为630 nm）。

2.6 统计方法

数据x拔 ± s 表示，组间差异用t 检验。

3 结 果

3.1 CE 对体外培养的S180 腹水瘤及腹水肝癌细胞生长的影响

CE 在1.78、0.89、0.45、0.22 mg/ml 的浓度下对小鼠腹水瘤S180细胞均有明显的细胞毒作用（因篇幅问题，表1省略），细胞杀伤率（％）分别为97±15、84±13、56±6.7、21±4.8，表现出剂量依赖性，随剂量的增大而作用增强。上述浓度的CE 对腹水肝癌HCA 细胞同样有明显的细胞毒作用，细胞杀伤率（％）分别为98±15、90±10、85±11、44±6.1，并具有剂量依赖性，随剂量的增大而作用增强。而1.0 mg/ml 环磷酰胺的细胞毒作用低于1.78、0.89 mg/ml 的CE 溶液，约与0.45、0.22 mg/ml 的CE 溶液细胞毒性相当。

3.2 CE 对小鼠腹水瘤S180 的体内抗肿瘤作用

CE 两个剂量单独给药时，对肿瘤块均有一定的抑制作用（因篇幅问题，表2省略），其中高剂量3.65 g/（kg · d）作用更显著，抑瘤率（％）达28±0.29，与NS 组比差异显著；CE 与剂量为50 mg/（kg · d）的环磷酰胺联合使用时，可使瘤块重量显著下降，抑瘤率（％）分别为59±0.58 和41±0.72，优于同剂量的环磷酰胺单独使用（抑瘤率（％）为34±40.46）。

3.3 CE 对小鼠腹水肝癌HCA 的体内抗肿瘤作用（因篇幅问题，表3省略）

由表3 可见，CE 两个剂量单独给药时，对肿瘤块均有抑制作用，高剂量3.65 g /(kg · d)作用更显著，抑瘤率（％）达34±0.59，与NS 组比有显著差异；CE 与剂量为50 mg/（kg · d）的环磷酰胺联合使用时，可使瘤块重量显著下降，抑瘤率（％）分别为56±0.62 和46±0.53，优于同剂量环磷酰胺单独使用时的抑瘤率（％）26±0.17。

3.4 CE 对小鼠免疫功能的影响（因篇幅问题，表4省略）

由表4 可见，CE 有明显的增强小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的作用，并对ConA 诱导的小鼠淋巴细胞起着促进其增殖的作用。​

4 讨 论

本研究结果证实CE 有明显的抑癌作用，与环磷酰胺联合使用优于单用化疗药物，而CE 对巨噬细胞吞噬功能增强以及对ConA 诱导的小鼠淋巴细胞增殖促进，都提示CE 有增强免疫功能的作用。因此，CE 可作为化疗辅助药物。鉴于化疗虽然对癌细胞具有杀伤力，但对病人的身体机能伤害也很大，而CE则杀伤癌细胞，增强免疫系统功能，提升化疗药物的抑癌效率，同时保护病人的免疫系统少或免受伤害。因此，我们认为应在CE 与化疗药物的联合使用方面作更深入的研究。

（参 考 文 献）

（1）陈峰，姜悦. 微藻生物技术[M]. 北京：中国轻工业出版社，1999. 22.

（2） Willam H L, Michael R. Chlorella：The Sunpowered Supernutrient and its Beneficial Properties[M]. New Canaan , Keats publishing, Inc.1987. 24.

（3）李继成，林则田，张启堂，等. 内折香茶菜素和内折香茶菜D 抗肿瘤作用的实验研究[J].中草药，2001，32:49－52.

（4）王宗伟，王勇，黄兆胜，等. 芦荟多糖的抑瘤作用及其机理研究[J]. 中药材，2001，24：350－352.

（5）蔡仙德，谭剑萍，穆维同，等. 黄芩甙对小鼠细胞免疫功能的影响[J]. 南京铁道学院学报，1994，13: 65－68.​