以下试验说明：小球藻对肝脏起到很好的保护作用，降低药物性肝损伤，抑制转氨酶的升高。同时还能升高谷胱甘肽的含量，从而保护肝脏。

小球藻提取物对大鼠急性肝损伤的保护作用

孟楠1，黄裕景2，金容镐2，孙立新1

(1．沈阳药科大学药学院，辽宁沈阳110016；

2．仁济大学，韩国金海621749)

摘 要

目的：利用四氯化碳诱导大鼠急性肝损伤模型，研究小球藻提取物对急性肝损伤的保护作用。

方法：利用四氯化碳诱导大鼠急性肝损伤，测定大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)活性，肝组织中谷胱甘肽(GSH)、丙二醛(MDA)水平及谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性，分析小球藻提取物对上述指标的影响。

结果：小球藻提取物显著降低大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)，天冬氨酸氨基转移酶(AST)以及肝组织中MDA值并促进肝组织中GSH-Px活性及GSH含量的升高。

结论：小球藻提取物对四氯化碳所致大鼠急性肝损伤具有明显的防治作用。

关键词：小球藻；四氯化碳；肝损害

中图分类号：R285.5 

文献标识码：A 

文章编号：1008-0805(2009)01-0163-01

四氯化碳(CCl4)是一种经典的肝毒物，其致肝损害可能与膜脂质过氧化有关（1）。小球藻为绿藻门普生性单细胞藻类，含丰富的蛋白质、脂质、多糖、食用纤维、维牛素、微量元素和活性代谢物，常作为医疗保健品（2-4）。关于小球藻水提物的体外抗氧化活性已有报道（5）。本实验通过四氯化碳致大鼠肝损伤模型，研究了小球藻水提物对大鼠肝损伤的保护作用。

1. 器材与方法

1.1 材料

1.1.1 药品与试剂四氯化碳(CCl4)、谷胱甘肽(GSH)、还原型辅酶Ⅱ、玉米油(美国Sigma公司)，丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)试剂盒(韩国ASAN PHARM公司)，丙二醛(MDA)试剂盒(美国Oxford  Biomedical Research公司)。

1.1.2 仪器Optizen分光光度计(韩国Mecasys公司)，SynergyHT多功能酶标仪(美国BIOTEK公司)，Optima L-100XP超速离心机(美国Beckman公司)，匀浆机(美国IKA Works公司)。

1.1.3 动物健康雄性Sprague-Dawley大鼠60只，体重(160-180g)，购于韩国Hyo-Chang Science公司。小球藻由韩国Marine Microalgae Culture Center提供。

1.2  方法

1.2.1 提取物的制备

将500g干燥的小球藻粉混悬于适量蒸馏水中，90℃提取30min，提取两次，合并提取液，离心60min，上清液用1um玻璃纤维滤器过滤后，冷冻干燥，得粗粉63g，于-20℃保存备用。

1.2.2 动物分组及给药方法

健康雄性大鼠60只，随机分为正常组，模型组，小球藻提取物大剂量组、中剂量组、小剂量组和阳性对照组6个组，每组10只。小球藻提取物给药组分别按10，5，2.5g/kg量予小球藻提取物灌胃，阳性对照组按0.3g/kg水飞蓟素灌胃，正常组、模型组按等体积生理盐水灌胃，共7d。末次给药1h后，模型组和给药组腹腔注射20％CCI4玉米油溶液(2ml/kg)，正常组腹腔注射等体积玉米油溶液，禁食，不禁水。24h后乌拉坦麻醉，下腔静脉取血，离心后取得血清，置于-20℃保存。采血后迅速摘除肝脏，用冷PBS缓冲液洗涤干净，滤纸吸干水分后，-80℃保存。

1.2.3 检测方法

按试剂盒说明测定血清中AST，ALT活性及肝组织中MDA含量。肝组织中谷胱甘肽过氧化酶(GSH-Px)活性测定参照Lawrence RA等（6）的方法。GSH含量测定按照Teiz，F（7）的方法，将肝组织匀浆、离心后，取上清液测定。

1.3 统计学方法

数据以Mean±s表示，使用SPSS11.5分析软件对各组进行方差分析(ANOVA)，P<0.05认为有统计学意义。

2. 结果

2.1 对血清ALT及AST的影响

如表1（省略）所示，一次腹腔注射给大鼠CCI4后24h，CCI4模型组和给药组血清ALT及AST均显著上升，说明肝细胞受损，但小球藻提取物明显降低CCl4所致ALT及AST的升高(P<0.05或P<0.01)。

2.2 对肝组织MDA，GSH，GSH-Px的影响

MDA含量在注射CCl424h后水平明显升高，但给药组明显低于CCl4模型组(P<0.05或P<0.01)。同时，小球藻水提物明显提高肝组织内GSH含量(P<0.05)，增强GSH—Px活性(P<0.05或P<0.01)。结果见表2（省略）

3. 讨论

CCl4是制作试验性肝损伤的常用药物。CCI4进入体内经肝药酶450激活产生三氯甲基过氧自由基和氯自由基，引起生物膜脂质过氧化并与膜上脂质及蛋白质分子进行不可逆结合，导致肝细胞的损伤坏死，使细胞内转氨酶溢出进入血液，从而造成ALT及AST活性的升高（8）。丙二醛(MDA)是多不饱和脂肪酸被氧化的产物，其含量的多少能反映机体内脂质过氧化的程度。GSH是属于含有巯基的、小分子肽类物质。GSH(尤其是肝细胞内的GSH)具有非常重要的生理作用就是整合解毒作用，能与某些药物(如扑热息痛)、毒素(如自由基、重金属)等结合，参与生物转化作用，从而把机体内有害的毒物转化为无害的物质，排出体外。谷胱甘肽过氧化酶是重要的催化过氧化氢分解的酶，它特异性的催化还原性GSH对过氧化氢的还原反应，从而起到保护细胞膜结构与功能的完整作用。研究表明，肝损伤可引起肝组织中谷胱甘肽过氧化酶活性以及GSH含量的降低（9）。

本实验结果表明，小球藻提取物能增加肝组织中GSH（谷胱甘肽）含量，增强GSH-Px（谷胱甘肽过氧化酶）活性，进一步提高了组织的抗氧化能力和解毒能力，通过抑制自由基的产生和促进自由基的转化排出，降低CCI4对大鼠肝组织的损伤作用，降低了生物膜脂质过氧化的发生，增强生物膜的稳定性，从而降低大鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)及肝组织中MDA（丙二醛）值，提示小球藻提取物对CCl4所致大鼠急性肝损伤具有一定的防治作用。

参考文献

（1）仲朱福，张瑾岗，张富勤，等．四氯化碳致大鼠肝损伤的机理[J]．中国约理学与毒理学杂志，1989，4:298.

（2）刘学铭，梁世中．小球藻在食品工业中的应用及小球藻食品的研制[J]．武汉食品工业学院学报，1999，1：47.

（3）De Souza QJ，Malacrida SA，Justo GZ．el a1.Myelopoietic response in mice exposed to acute cold／restraint stress：Modulation by chlorella vulgaris prophylactic treatment[J]．Immunopharmacol lmmunotoxicol。2004，26(3)：455.

（4）杨鹭生，李曰平，陈林水．蛋白核小球藻粉的蛋白质氨基酸含量及营养价值评价[J]．亚热带植物科学，2004，32(1)：36.

（5）wu Lc，Ho JA，Shien MC，et al．Antioxidant and antiproliferative activities of Spirulina and Chlorella water extracts[J]．J Aqric Food Chem，2005，53(10)：4207．

（6）Lawrence RA，Burk RF．Glutathione peroxidase activity in seleniumdeficient rat liver[J]．Biochem Biophys Res Commun．，1976，71：952．

（7）TEITZ，F．Enzymatic method for quantitative determination for nanogram amounts of total and oxidized glutathione[J]．Anal．Biochem。1969，27：502．

（8）Shimizu I，Mm YR，Mizobuchi Y，et al．Effects of Sho-saiko-to，a Japanese Herbal Medicine，on hepatic Fibrosis in Rats[J]．Hepatology，1999，29(1)：149.

（9）金香子，金政，蔡英兰．决明子水提物对D-半乳糖中毒大鼠急性肝损伤的保护作用[J]．时珍国医国药，2007，18(3)：582．